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金標準系列猛將:ProPac 3R單分散離子交換色譜柱分析挑戰性蛋白治療藥物

閱讀:2785      發布時間:2024-7-24
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ProPac 3R
 
  近年來生物制藥發展迅速,蛋白藥物大多存在翻譯后修飾且種類復雜多樣,因此研發過程中的質量控制顯得尤為重要,其中電荷異質性是關鍵質量屬性(CQA)之一,其可能影響生物制品的療效,甚至有可能帶來意想不到的副作用,從而影響藥品的安全性和有效性,所以在抗體藥物開發過程中選擇一種靈敏度高、特異性強的電荷異質性檢測分析方法,是控制和穩定抗體藥物生產質量的有效手段。離子交換色譜技術廣泛用于生物制藥的開發以及蛋白藥物電荷變異體的分離。賽默飛離子交換色譜柱,從ProPac WCX-10開始,不斷致力于為客戶帶來分析流程中的“金標準”。
 
  ProPac 3R進一步完善應用方法,提供更優的分離度結果,并采用單分散填料(圖1)解決批次重現性問題。它采用生物惰性材料設計,可以為蛋白質和AAV等分析提供可重復、高分辨率和耐用的強陽/陰離子交換色譜分離,尤其在具有挑戰性的多抗、融合蛋白、ADC及復方共制劑等新興治療藥物電荷異質體分析中提供更高分辨率和重現性。“3R”取至穩健性(Robustness)、重現性(Reproducibility)、分辨率(Resolution)英文的首字母,突出體現了3R的性能優勢,孔徑也從傳統的10μm升級至小粒徑的3μm。

圖1  3μm單分散ProPac 3R粒子(左)與3μm多分散粒子(右)的SEM圖像

 
  雙特異性抗體
 
  圖2展示在鹽梯度條件下,ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱與傳統單分散強陽離子交換色譜柱在分析雙抗電荷異質體中的對比,ProPac 3R不僅在分辨率上有獨特的優勢,在響應上也有顯著優勢。

圖2  ProPac 3R SCX色譜柱與多分散強陽離子交換在雙抗的分離譜圖

 
  融合蛋白
 
  圖3展示在鹽梯度條件下,ProPac 3R SAX (4x100 mm,3 μm)色譜柱與傳統單分散強陰離子交換色譜柱在分析融合蛋白電荷異質體中的對比,ProPac 3R在各組分分離上有較大的提升,更有利于后期制備后MS表征。

圖3  ProPac 3R SAX色譜柱與多分散強陰離子交換在融合蛋白的分離譜圖

 
  抗體偶聯藥物ADC
 
  圖4展示在商品化CX-1 PH buffer條件下,ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm)色譜柱與傳統單分散強陽離子交換色譜柱在分析ADC電荷異質體中的對比,ProPac 3R在特別難分的酸性變異體中有更高的分辨率,為QC放行提供更穩定的方法。

圖4  ProPac 3R SCX色譜柱與多分散強陽離子交換在ADC的分離譜圖

 
  復方共制劑
 
  復方共制劑是有兩種及以上蛋白藥物按照不同比例組成的,蛋白比例和每種蛋白酸堿變異體的比例是需要檢測的,這給離子交換液相色譜法帶來巨大的挑戰。圖5展示在商品化CX-1 PH buffer條件下,ProPac 3R SCX (4x100 mm,3 μm) 不僅得到了兩種不同蛋白比值與理論值一致的結果,而且可以得到每種蛋白各自酸堿變異體的比值。

圖5 ProPac 3R SCX色譜柱在復方共制劑的分離譜圖

 
  結論
 
  ProPac 3R單分散色譜柱在多特異性抗體、ADC、融合蛋白和復方共制劑分析中均表現出優越的分離性能和很高的靈敏度,且單分散的填料保證了批與批之間結果的穩定性,方法耐用性的標準進一步提升。
 
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